《中国生物制品规程》B、人二倍体细胞脊髓灰质炎活疫苗·

1 毒种

与A1项相同。

2 细胞

2.1 细胞株

用于疫苗生产的人二倍体细胞株必须不含外源因子，核型正常，对病毒敏感。可用KMB-17、2BS等株。所用细胞株须经卫生部批准。

2.2 原始细胞种子批

一个细胞种子批，应有足够量的早世代细胞，分装安瓿保存于液氮中。

2.3 生产用细胞种子批

用一个或多个安瓿细胞种子，传代繁殖到适宜世代，具有一定量的均一细胞，分装安瓿，冻存于液氮中。

2.4 生产用细胞种子批检定

按《人二倍体细胞建株、检定及制备疫苗规程》要求进行。

3 疫苗制备

3.1 细胞培养

从生产用细胞种子开始培养，以适宜分种率连续传代，直至累积足够量的细胞培养物。用于生产的细胞代次应在整个生命周期的前2/3代次内。

3.2 病毒接种、培养与收集

与A2.2项相同。

3.3 病毒液合并

与A2.3项相同。

3.4加氯化镁与分批

与A2.4项相同。

3.5 分装

与A2.5项相同。

4 检定

4.1 生产用人二倍体细胞外源因子检查

于种毒当天，每批细胞留取2%～5%不种毒，换液作为正常细胞对照，以检查外源因子。从接种之日起，观察2周，其形态不应有改变。

于种毒0～2天，对照细胞上清液接种原代幼兔肾、非人灵长类传代细胞及另一株人二倍体细胞。接种的样品量应占维持液的20%以上，观察14天。种毒后5～8天用上述细胞盲传一代，传代后观察14天，应无细胞病变。

在种毒时，用0.5%鸡、豚鼠混合红细胞在4～8℃和20～25℃做血吸附试验，检查对照细胞。

4.2细胞鉴别试验

在生产用细胞水平世代或其后数代，作中期细胞染色体检查，粗数300个细胞，细数100个细胞，其核型应正常。以鉴别确为生产用细胞无误。

4.3 病毒液检定

4.3.1 外源因子检查

样品以脊髓灰质炎病毒型特异性抗体（非人源抗体，该抗体不能用猴制备，免疫用的抗原不能用生产用的细胞制备）或单克隆抗体中和，中和物（可稀释，但稀释度不应超过1∶4）接种对麻疹病毒敏感的细胞和另一株人二倍体细胞，并留取正常细胞对照，37℃培养观察2周。观察期间由于非特异原因废弃的细胞瓶数应少于20%。如发生任何因外源因子引起的细胞病变，则该批病毒液应废弃。

4.3.2 无菌试验及支原体检查

与A3.2.2项相同。

4.3.3 病毒滴定

结果判定蚀斑法为4～6天，其他同A3.2.3项。

4.3.4 型特异性检定

与A3.2.4项相同。

4.3.5 猴体试验

与A3.2.6项相同。

4.3.6rct特征试验

与A3.2.7项相同。

4.4 成品检定

与A3.3项相同。

5 保存与效期

与4项相同。