《中国生物制品规程》附录2　抗凝剂、分血浆袋及采血器的热原质检查·

采用家兔法。亦可用细菌内毒素检查法，有异议时用家兔法仲裁。

1 家兔法

按《生物制品热原质试验规程》进行，判定标准按该规程4.2项要求进行，其抽样方法与注射剂量如下：

1.1 抗凝剂

按家兔体重2ml/kg注射。

1.2 采血器及分血浆器

采血器及分血浆器应有批号，每批抽一定数量进行检查，方法为用100ml氯化钠注射液通过，检查流过液，应无肉眼可见的混浊或异物，注射剂量按家兔体重10ml/kg注射，合格后方能使用。

1.3 分血浆袋

抽取分血浆袋10只，用100ml氯化钠注射液清洗，检查清洗液，应无肉眼可见的混浊和异物，按家兔体重10ml/kg注射。

2 细菌内毒素检查法

2.1 试验要求

2.1.1 用具处理

试验所用器皿需除去可能存在的外源性内毒素，常用的方法是250℃至少30分钟或180℃至少2小时干烤。

2.1.2 鲎试剂灵敏度复核

根据鲎试剂灵敏度的标示值（λ）将细菌内毒素国家标准品，用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混合15分钟，然后制备成合适的2倍稀释浓度，即2λ、λ、0.5λ、0.25λ备用，每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒钟，按2.2项试验，每一稀释液平行做4管，如最高浓度4管均为阳性，最低浓度4管均为阴性，按下式计算鲎试剂灵敏度测定值（λc）。

Λc=log-1（ΣΧ）/4

X为反应终点内毒素浓度的对数值。

当λc在0.5～2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）时，方可用于细菌内毒素检查，并以λc为该批鲎试剂的灵敏度。每批新的鲎试剂在用于试验前都要进行灵敏度的复核。

2.1.3 供试品干扰试验

按2.1.2项试验，用供试品的最大有效稀释液将细菌内毒素国家标准品制成2.0λ、0.5λ、0.25λ浓度稀释液。供试品的最大有效稀释倍数（D）按下式计算：

D=L/λ

L为供试品的细菌内毒素限值（EU/ml）。

如果有供试品和无供试品测得的鲎试剂灵敏度（λc）在0.5～2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）时，则认为供试品在该浓度下不干扰试验，否则需要进行适当处理后重复本试验。使用更灵敏的鲎试剂，对供试品进行更大的倍数稀释，是排除干扰的简单有效方法。

2.1.4 供试品

2.1.4.1 抗凝剂

取原液作160倍稀释后测定。原液细菌内毒素含量应≤5.56EU/ml。

2.1.4.2 采血浆器及分血浆器

取1.2项流过液测定。细菌内毒素含量应≤0.5EU/ml。

2.1.4.3 分血浆袋

取1.3项清洗液测定。细菌内毒素含量应≤0.5EU/ml。

2.2 方法

取装有0.1ml鲎试剂溶液的10×75mm试管（或0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿）4支，其中2支加入0.1ml供试品作为供试管，1支加入2λ内毒素工作标准品溶液0.1ml作为阳性对照管，1支加入细菌内毒素检查用水0.1ml作为阴性对照管。将试管中溶液轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入37±1℃水浴中，保温60±2分钟。保温和拿取试管过程应避免受到振动造成假阴性结果。

2.3 结果判定

将试管从水浴中轻轻取出，缓缓倒转180°时，管内凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（+）；凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（-）。供试品两管均为（-）应认为符合规定；如两管均为（+），应认为不符合规定；如两管中1管为（+），1管为（-），按上述方法另取4管供试品管复试，4管中有1管为（+），即认为不符合规定。阳性对照为（-）或阴性对照为（+），试验无效